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脂肪酶可將甘油酯（油、脂）水解，在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油。水解生成的脂肪酸，可以用標準的堿溶液滴定，以滴定值表示酶活力。

ATGL脂肪甘油三酯脂肪酶，HSL激素敏感性脂肪酶，和單脂脂肪酶，其中ATGL只水解TG，而HSL可以水解TG和DG，而MGL只水解甘油單酯。

微生物來源的脂肪酶可用來增強干酪制品的風味。牛奶中脂肪的有限水解可用于巧克力牛奶的生產。脂肪酶可使食品形成特殊的牛奶風味。

脂肪酶可通過甘油單酯和甘油雙酯的釋放來阻止焙烤食品的變味。生產明膠時骨頭的脫脂，需要在溫和條件下進行，脂肪酶催化的水解可以加速脫脂過程

脂肪酶具有油-水界面的親和力，能在油-水界面上高速率的催化水解不溶于水的脂類物質；脂肪酶作用在體系的親水-疏水界面層，這也是區(qū)別于酯酶的一個特征。